​细菌培养实验室的规划设计

细胞培养是一项无菌技术，要求其操作环境和操作条件都要做到无菌化、无害化。为了防止微生物污染及有害因素的影响，要求实验室设计环境干净，空气清新、干燥、无尘。

该细胞培养实验室由无菌操作区、孵育区、制备区、贮藏区、清洗消毒区6个部分组成，其共同特点是：房间宽敞、明亮，地面清洁防滑，墙壁纹理光滑，仪器设备布局合理，操作方便，避免交叉干扰。

一、消毒操作区域。

无菌操作区是局限于细胞培养和其他无菌操作的区域，能与外界隔离，不能穿过或受到其他干扰。通常环境中空气中存在大量的尘埃和杂菌，极易造成污染。

所以接种工作要在经过空气消毒的环境中进行，超净工作台可以创造小规模的无菌环境，大量需要建立无菌室。

无菌室应该被划分成三个部分：

1.更衣间——可更换衣物、鞋子、帽子和面罩。

2.缓冲室——位于更衣室和操作室之间，是为了做好准备，防止污染，确保操作间的无菌环境，可放置恒温培养箱和必要的小型仪器。

3.无菌操作间——无菌操作间是专门用于无菌操作、细胞培养的，其大小要合适，且顶部不宜过高，以保证紫外线；墙壁光滑、无菌操作间可进行清洗和消毒，无菌操作间容积小且为密闭式，一般无菌操作间的空气消毒用紫外线灯，不能太高；墙壁光滑，以便清洗和消毒，无菌操作间为密闭式，一般无菌操作间使用。

4.净化工作台：操作简单，安装方便，占地面积小，净化效果非常好。在普通细菌培养室中使用的净化工作台主要有两种：a)侧向流式或称垂直向流式。

二、孵化区

孵化区也叫培养区，虽然这里的无菌要求并不比无菌区严格，但也需要洁净、无尘，因此，也应该设置在干扰少、不干扰的地方。孵化可在育雏室或温控温室中进行，后者费用较高，一般实验室多采用孵化箱。

三、备用区域

制备区主要用于培养液的制备和相关液体等。仪器柜、器械柜、实验台、上水道、电源等，主要仪器设备有水净化装置、天平、微波炉、pH计、抽气泵、电炉、培养分装器、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管、烧杯、量筒、容量瓶等。

配制完毕后，在有天平、pH计、磁力搅拌器等设备下，应在无菌操作台中过滤。液相制备直接关系到组织细胞养的成败，必须严格无菌操作。

四、储藏区。

储存区主要储存各种类型的冰箱、干燥箱、液氮罐、无菌培养液、培养瓶等，也要求清洁、无尘。要保存细胞，尤其是不容易被利用的变异类型或细胞株，应冻结细胞。冻结温度通常为液氮温度-196℃。

在4℃保存30min时，细胞的冷冻过程需要一系列的冷却程序。将-20℃1h转放，再转入-80~-70℃过夜，然后转至液氮内(-196℃)。所以储藏区域要有冰箱、低温冰箱、超低温冰箱、液氮罐等设备。

五、清洁及消毒区域。

清洗消毒区域应与其它区域分开，主要是所有细胞培养器的清洗、准备、消毒、三蒸水准备等工作，并应有高压蒸汽锅、细菌过滤装置、电热干燥箱、消毒柜、排风设备等。

六、建造细胞实验室设计的要求。

1、环境要求。

温度：仪器或操作时对温度没有特殊要求，保持舒适温度即可，如18~26度。

湿气：湿度过高会造成微生物的滋生，所以建议正常的湿度保持在70%以下。

清洁度：细胞实验对洁净区没有要求，细胞实验中只有细胞操作时需要无菌环境，此时要求有局部百级，一般可使用超净台或生物安全柜，但有时为了有一个更好的环境，减少超净台过滤器的更换时间，会维持室内的洁净度，比如万级的洁净度。

在体外培养中，无菌、无毒的操作环境和培养环境是细胞成功培养的关键。无菌环境对细胞培养有严格的要求，在操作细胞时，一般要在100级空气质量条件下进行。

被微生物或有毒物质污染，或自身代谢物质累积，会导致细胞中毒而死亡，因为它们缺乏对微生物和毒素的防御能力。

灯光：满足试验照度，一般为300LUX。

2、围护结构要求。

尽管实验操作对大环境没有特别的要求，但能有不产尘、不积尘的环境，能够保证室内清洁，而且容易清洗，不容易滋生微生物，所以在选择使用彩板、彩板等洁净材料时，选用彩板、彩板等洁净板材是比较好的选择，可以布置密闭窗。

3、消毒。

一般做完实验后，需要进行终末消毒，室内需要安装紫外灯，利用紫外灯对空气和表面进行消毒。

六、应注意细胞实验室设计规划。

1、放置细胞培养室，必须保证空调在冬季能进行制冷，特别是在密闭的环境中，培养箱等设备的散热会比较大，造成室内温度过高。

2、如果设计成净化实验室，需要按照净化实验室的要求来做，如果要做涉及生物安全的细胞，则必须按照生物安全实验室的要求来设计，具体要根据所做实验的种类，确定实验室的设计要求，以及所选择的设备，是要选择超净工作台还是生物安全柜。

3、在临床上进行细胞的，要根据具体的规范要求进行建设。

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